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首页 > 磁珠法病毒DNA/RNA提取试剂盒
磁珠法病毒DNA/RNA提取试剂盒
¥ 0.00
货号:JZ-017864
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产品详情:

基本信息

产品简介

本试剂盒设计用于从血清、血浆、尿液、细胞培养液上清、病毒原液及感染病毒的组织中快速分离各种病毒DNA/RNA。通过本公司自主研发的超顺磁性磁珠,在特殊的缓冲体系作用下,核酸特异的吸附于磁性粒子表面,蛋白、细胞碎片以及其他污染物可有效的被漂洗,最后用Nuclease-free Water洗脱得到高质量的DNA/RNA。得到的高质量DNA/RNA可直接进行下游PCR、cDNA合成、RT-qPCR等分子生物学实验。

 

储存与运输

Proteinase K和Carrier RNA冰袋(wet ice)运输,-20℃保存;其余试剂室温运输,室温储存;有效期12个月。

 

组成

Component

50T

Buffer MVL

10 mL

Proteinase K

1 mL

Carrier RNA

50 μL

SweMag Beads

1 mL

Buffer MPA

12 mL(使用前加入18 mL无水乙醇)

Buffer MPB

15 mL(使用前加入60 mL无水乙醇)

Nuclease-free Water

12 mL

说明书

1份


使用前准备

1. Buffer MVL和Buffer MPA如有沉淀现象,请于37℃加热溶解,待恢复室温后使用。

2. 首次使用前请向Buffer MPA中加入18 mL的无水乙醇,Buffer MPB中加入60 mL的无水乙醇。

3. 首次使用前可先将Carrier RNA分装后于-20℃保存,应避免反复冻融。

4. 使用组织研磨仪时,提前将研磨仪预冷。

5. 自备磁力架。

 

实验步骤

1. 病毒样本的处理:

a) 血清、血浆、尿液、细胞培养液上清和病毒原液的裂解:取10-200 μL的血清、血浆、尿液、细胞培养液上清或病毒原液,起始量不足200 μL可用PBS或Nuclease-free Water补至200 μL。

b) 感染病毒的组织裂解:取10-20 mg新鲜或超低温冻存的感染病毒的组织,置于装有2-3颗3 mm研磨珠的1.5 mL Nuclease-free离心管或专用研磨管中,立刻将装有组织的离心管或研磨管置于液氮中,随后使用组织研磨仪在低温条件下将组织彻底研磨至匀浆状(如果组织没有被彻底匀浆,将会影响DNA/RNA的得率和质量),研磨后加入200 μL的PBS或Nuclease-free Water。

2. 加入200 μL Buffer MVL,20 μL Proteinase K和1 μL Carrier RNA,充分混匀后于56℃孵育10 min;

3. 加入200 μL无水乙醇,颠倒混匀,再加入20 μL SweMag Beads(SweMag Beads使用前需涡旋至分散均匀),上下颠倒数次,至磁珠分散均匀;

4. 室温放置10 min,期间使用移液器或涡旋仪混匀2-3次,至磁珠分散均匀;

5. 将离心管移至磁力架上静置30 s,直至磁珠完全吸附,将离心管随磁力架温和地上下颠倒数次,使管壁残留的磁珠冲刷下来,待上清清澈后,吸弃上清(为避免影响提取效率,请勿将磁珠吸出);

6. 移开磁力架,加入500 μL Buffer MPA,使用移液器轻轻吹打至磁珠分散均匀,将离心管移至磁力架上静置30 s,再将离心管随磁力架温和地上下颠倒数次,使管壁残留的磁珠和盐分冲刷下来,待上清清澈后,吸弃上清(为避免影响提取效率,请务必吸尽离心管内残留的液体);

7. 移开磁力架,加入700 μL Buffer MPB,使用移液器轻轻吹打至磁珠分散均匀,将离心管移至磁力架上静置30 s,再将离心管随磁力架温和地上下颠倒数次,使管壁残留的磁珠和盐分冲刷下来,待上清清澈后,吸弃上清(为避免影响提取效率,请务必吸尽离心管内残留的液体);

8. 重复操作步骤7;

9. 将离心管盖打开,室温放置5–10 min,使乙醇完全挥发(避免磁珠过度干燥,以免影响核酸得率);

10. 移开磁力架,向离心管中加入50-80 μL Nuclease-free Water,用移液器轻轻吹打至磁珠分散均匀,室温静置3 min;

11. 将离心管置于磁力架上,直至磁珠完全吸附,吸取上清至一新的Nuclease-free离心管中,即得高纯度的DNA/RNA。

 

注意事项

1. 操作之前,请务必认真阅读本产品说明书。

2. 由于提取过程中加入了Carrier RNA,不能通过电泳或吸光度计测定定量。

3. 本试剂盒提供的Carrier RNA是大肠杆菌来源的RNA,主要是为了提高微量核酸的回收效率与防止得到的微量RNA被降解,如果PCR扩增引物与Carrier RNA具有较高同源性时,可重新设计引物。

4. 磁珠易沉淀,使用前应涡旋至磁珠分散均匀。

5. 磁珠悬液在保存过程中避免冷冻。

6. 向样本中加入磁珠前,需要将样本与其他试剂混合均匀。

7. 洗脱前,应使乙醇完全挥发,避免残留的乙醇影响下游实验。

8. 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

注意事项

1、收到细胞后,若发现干冰已挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及细胞有污染,请立即与我们联系。

2、收到细胞先不开瓶盖,瓶身擦拭酒精后放在培养箱静置2-4小时(视细胞密度而定)稳定细胞状态。接着在倒置显微镜下观察细胞生长情况,并对细胞进行不同倍数拍照(建议收细胞时就整体外观拍一张照片,观察培养基的颜色和是否有漏液情况,随后在显微镜下拍下细胞状态,100*,200*各一张),观察记录细胞在运输过程中是否有污染情况。作为我方进行销售依据。

3、由于细胞状态受环境、操作和运输等多方面因素影响,故本公司只保证客户收到细胞后一周内的细胞状态,故客户需要售后时需出示收到细胞的时间证明及客户提供收货时间和发现问题后客服人员沟通的时间证明,期间间隔时间不能大于7天。

4、所有动物细胞均视为有潜在的生物危害性,必须在二级生物安全台内操作,并请注意防护,所有废液及接触过此细胞的器皿需要灭菌后方能丢弃。

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